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topogen
產品時間:2020-07-14
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動塑料DNA(kDNA)

SKU 尺寸       價錢       數量      

TG2013-1      25微克   15.00          

TG2013-2      50微克   2.00            

TG2013-3      250微克 3.00            

 

kDNA產品說明

kDNA是拓撲異構酶II分析的理想底物,因為它對II型反應機制具有特異性。研究人員甚可以在存在大量過量的拓撲異構酶I的情況下檢測II型酶。因此,kDNA可以很好地量化粗細胞提取物中的II型活性,而粗提物中經常富含拓撲異構酶I。kDNA底物在人類中的表現異常出色前2a和b以及原核生物酶,例如DNA促旋酶或拓撲異構酶IV。該底物與我們的Topo II分析試劑盒,Topo II藥物試劑盒和旋回酶分析試劑盒包裝在一起。

 

由于部分純化的部分中存在topo I,因此基于超螺旋DNA松弛而采用粗提物進行topo II活性的測定可能會很復雜。由于污染核酸酶活性(由于Mg ++),會引起額外的復雜性,這會降解或切割超螺旋底物。通過使用從昆蟲錐蟲Crisidia fasciculata的運動塑料中制備的鏈狀DNA底物,可以避免這些問題。動塑料DNA(kDNA)是互鎖的DNA小環(大多數為2.5 kb)的聚集體,形成了非常大的高分子量網絡。結果,這些網絡無法進入瓊脂糖凝膠。孵育后 與DNA參與雙鏈斷裂和團聚循環的topo II,有效釋放了微環狀DNA。由于它們的小尺寸,已分離的微型圓迅速移入凝膠。拓撲異構酶I不會發生此反應。反應產物可能如下變化:

 

質量控制測試:

 

對于連接的KDNA底物,少90%的DNA將保留在1%瓊脂糖凝膠的孔中。

 

用純化的拓撲異構酶II測試每批Kinetoplast DNA的變性。

儲存緩沖液:

kDNA以產品的濃度儲存在10 mM Tris-Cl(pH 7.5)和1 mM EDTA中。

 

評論和引用:

 

菲利普斯·JW,格茨·馬薩諸塞州,史密斯·SK,辛克·DL,波蘭克·J,奧尼西·R,薩洛·S,威爾西·J,阿洛科·J,西格蒙德·J,多爾索·K,李·S,Skwish S,德拉克魯茲M,馬丁·J,維森特Genilloud O,Lu J,畫家RE,Young K,Overbye K,Donald RGK,Singh SB:發現Kibdelomycin,這是一種通過金黃色葡萄球菌的化學基因分析方法開發的新型新型II型細菌異構酶抑制劑。  細胞化學與生物學 2011,18:955-965。doi:10.1016 / j.chembiol.2011.06.011。

 

運輸和存放說明:

kDNA應儲存在4°C下;但是,可以在-20°C下長期保存。DNA通常在環境溫度下運輸。

 

人Topoisomerase II分析試劑盒產品描述

 

該試劑盒旨在進行快速,特異性的II型真核DNA拓撲異構酶測定。該試劑盒可促進II型酶的純化和鑒定,并包含II型拓撲異構酶常規檢測所需的所有試劑。該測定基于動塑料 DNA(kDNA),并且由于它對II型活性(而非I型)具有特異性,因此可以用粗細胞提取物進行。反應產物使用由TopoGEN開發的新型凝膠系統解析,該系統可以極其快速且明確地檢測拓撲異構酶II的活性。包括適當的緩沖液,DNA底物和DNA標記。Human Top2a包含在目錄號中以-A表示的套件中。包含拓撲異構酶II脫鏈和線性DNA標記,可以清晰,輕松地識別用戶定義的提取物或級分中的topo II活性。該測定試劑盒還可以與純化的酶(由TopoGEN提供)結合使用,以檢測topo II的抑制劑。kDNA分析將檢測刺激topo II切割DNA的毒物以及僅抑制催化活性的物質。

 

人拓撲異構酶II檢測試劑盒內容(用于100個檢測試劑盒大小):

 

-100單位人類Top2a酶(目錄號TG1001-1A提供)-動

塑料DNA(kDNA)20

ug-凝膠上樣緩沖液中的

標記線性kDNA- 標記不連續的kDNA(經

Topo II處理)-10X Topoisomerase II測定緩沖液*

--5X終止緩沖液/凝膠加載染料-

詳細說明手冊

 

*為了提高穩定性,提供了10x Topo II Assay緩沖液作為兩個成分:緩沖液A(無ATP)和緩沖液B(ATP)。每次通過組合緩沖液A和B制成新鮮的10x分析緩沖液。

 

使用人類拓撲異構酶II檢測試劑盒滴定Topo II活性

 

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